BSA and molecular markers screening for salt stress tolerant mutant of "Petunia" obtained in in vitro culture

portuguesNeste estudo, realizamos BSA para identificar marcadores geneticos ligados a tolerância ao sal. Testamos a diversidade genetica entre quatro amostras de DNA volumoso de clones mutantes induzidos por EMS, e uma amostra de DNA volumoso de clone nao mutado de Petunia para tolerância a sal em culturas de calos in vitro usando marcadores RAPD e ISSR. Dos 36 primers RAPD e 16 ISSR identificados, 25 e 13 foram efetivamente usados para amplificar o DNA genomico de todas as cinco amostras, respectivamente. No total, foram obtidos 114 produtos de amplificacao RAPD, dos quais 28% eram polimorficos e 2% eram bandas especificas de genotipos. Dos 64 produtos de amplificacao ISSR obtidos, 51% eram polimorficos e 1% eram bandas especificas de genotipo. Os resultados deste estudo indicam a existencia de dois padroes de segregacao distorcida entre os marcadores estudados. O primeiro indica as diferencas entre os clones nao mutantes de Petunia e seus mutantes putativos. O segundo foi observado apenas entre mutantes putativos e mutantes putativos testados quanto a tolerância ao sal em cultura in vitro. Tanto a analise RAPD quanto a ISSR detectaram com sucesso a associacao com alteracoes induzidas por mutagenese quimica e salinidade. Alem disso, nossos resultados indicam que o metodo BSA pode ser util na deteccao rapida de marcadores moleculares para posterior selecao assistida por marcadores. Palavras-chave: analise segregante a granel; mutagenese quimica; ISSR; RAPD; Petunia × atkinsiana D. Don; estresse salino; cultura de tecidos. EnglishIn this study, we performed BSA to identify genetic markers linked to salt tolerance. We tested the genetic diversity among four bulked DNA samples of EMS induced mutant clones and one bulked DNA sample of non-mutated clone of Petunia for salt tolerance in in vitro callus cultures using RAPD and ISSR markers. Out of the 36 RAPD and 16 ISSR primers identified, 25 and 13 were effectively used to amplify genomic DNA of all the five bulked samples, respectively. In total, 114 RAPD amplifications products were obtained, of which 28% were polymorphic and 2% were genotype-specific bands. Out of the 64 ISSR amplification products obtained, 51% were polymorphic and 1% was genotype-specific bands. Results of this study indicated the existence of two patterns of distorted segregation among the studied markers. The first one indicates the differences between non-mutated clones of Petunia and its putative mutants. The second one was observed only between putative mutants and putative mutants tested for salt tolerance in in vitro culture. Both RAPD and ISSR analysis successfully detected the association with changes induced by chemical mutagenesis and salinity. Furthermore, our results indicate that BSA method can be useful in the rapid detection of molecular markers for further marker-assisted selection. Key words: bulk segregant analysis; chemical mutagenesis; ISSR; RAPD; Petunia × atkinsiana D. Don; salt stress; tissue culture.