Increase in post-thaw viability by adding seminal plasma proteins to Sanmartinero and Zebu sperm

Summary Background: cryopreservation decreases sperm viability by approximately 50%. Objective: the objective of this study was to determine the effect of the addition of seminal plasma proteins on post-thawing sperm viability in Sanmartinero and Zebu semen. Methods: semen samples from 10 bulls of each breed were used, and seminal plasma was subjected to two-dimensional electrophoresis to establish the relationship between the relative amount of each protein spot and sperm viability. Then, seminal plasma was subjected to exclusion chromatography to separate the fraction containing these proteins. This fraction was added in doses of 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0 mg, to 1 x 106. Sperm was thawed and incubated at 37 °C for 1 h to determine its effect on postthaw viability. Sperm were frozen using two media (citrate-fructose-yolk and Bioxcell®). Results: we found one protein spot (16.20 kDa, PI 5.5) in Sanmartinero seminal plasma that correlated (r = 0.64 p Conclusions: these results show that seminal plasma proteins decrease cryopreservation damage in sperm. The effect depends on the cryoprotectant dose as well as the breed of bull. Key words: creole bulls, cryopreservation, proteins, seminal quality, sperm membrane. Resumen Antecedentes : la criopreservacion disminuye la viabilidad espermatica por debajo del 50%. Objetivo: el objetivo de esta investigacion fue determinar el efecto de la adicion de proteinas del plasma seminal sobre la viabilidad espermatica post-descongelacion de semen de toros Sanmartinero y Cebu. Metodos : se colecto semen de 10 toros de cada raza, y el plasma seminal se sometio a electroforesis bidimensional, para establecer la relacion entre la cantidad relativa de cada punto de proteina y la viabilidad espermatica. Identificados dichos puntos, el plasma seminal se sometio a cromatografia de exclusion para separar la fraccion que contenia estas proteinas. Esta se adiciono en dosis de 0,5, 1,0, 1,5 y 2,0 mg, a muestras de 1 x 106 espermatozoides, descongelados e incubados a 37 °C durante 1 hora, para determinar su efecto en la viabilidad post-descongelacion. Los espermatozoides se congelaron usando dos medios (citrato-fructosa-yema y Bioxcell®). Resultados : se encontro un punto de proteina (16,20 kDa, punto Isoelectrico 5,5) en plasma de toros Sanmartinero, que correlaciono (r = 0,64 p Conclusiones : los resultados anteriores demuestran que las proteinas del plasma seminal disminuyen el dano en los espermatozoides por la criopreservacion, y que el efecto de estas proteinas depende del medio de congelacion, la dosis adicionada y la raza de los toros. Palabras clave: calidad seminal, criopreservacion, membrana espermatica, proteinas, toros criollos. Resumo Antecedentes : a criopreservacao diminui a viabilidade espermatica abaixo de um 50%. Objetivo: o objetivo desta pesquisa foi determinar o efeito da adicao de proteinas do plasma seminal na viabilidade espermatica pos-descongelamento de semen de touros das racas Sanmartinero y Zebu. Metodos: coletou-se semen de 10 touros de cada raca, as amostras do plasma seminal foram submetidas a eletroforese bidimensional, para estabelecer a relacao entre a quantidade relativa de cada ponto de proteina e a viabilidade espermatica. Ao serem identificados os pontos, o plasma seminal tambem foi submetido ao processo de cromatografia por exclusao para separar a fracao que continha as proteinas. A fracao foi adicionada nas doses de 0,5, 1,0, 1,5 y 2,0 mg, amostras de 1 x 106 espermatozoides, em descongelamento e incubados a temperatura de 37 °C durante 1 hora, para determinar o efeito na viabilidade pos-descongelamento. Os espermatozoides foram congelados utilizando dois meios (Citrato- frutose-gema e Bioxcell®). Resultados: encontrou-se um ponto de proteina (16,20 kDa, ponto Isoeletrico 5,5) no plasma de touro Sanmartinero, que correlacionou (r=0,64 p Conclusoes: os anteriores resultados demonstram que as proteinas do plasma seminal diminuem o dano nos espermatozoides pela criopreservacao e que o efeito destas proteinas depende do meio de congelacao, a dose adicionada e a raca dos touros. Palavras chave: criopreservacao, membrana espermatica, proteinas, qualidade seminal, touros mesticos.