Importancia de la preparación de la muestra en el estudio del metabolismo del clobenzorex

Introduccion: La seleccion del ensayo para estudiar el metabolismo de una sustancia depende de sus reacciones metabolicas, lo que puede influir positivamente en la selectividad del metodo y en la recuperacion de los analitos, entre otros. Objetivo : Definir la influencia de la preparacion de la muestra en el estudio del metabolismo del clobenzorex en las condiciones de trabajo del Laboratorio Antidoping de La Habana. Metodos: Se colectaron muestras de orina antes y despues de la administracion de una dosis de clobenzorex a un voluntario supuestamente sano. Se aplicaron tres ensayos A, B y C disenados para la deteccion de metabolitos de fase I y de fase II. El metodo de extraccion fue liquido-liquido y la diferencia entre los metodos fue la formacion de derivados y la hidrolisis enzimatica. La tecnica instrumental empleada fue la cromatografia de gases acoplada a espectrometria de masas y el modo de adquisicion de datos fue SCAN desde 50 a 600 Da. Resultados: La deteccion de los metabolitos del clobenzorex mas volatiles se vio afectada por la manipulacion de la muestra, mientras que los hidroxilados (de fase I) necesitaron de una hidrolisis para ser detectados. Con la aplicacion del metodo A se identificaron 3 compuestos, 5 con la aplicacion del metodo B y con la aplicacion del metodo C se identificaron los 8 metabolitos. A las 24 horas despues de administrado el farmaco se pudieron detectar 6 de estos compuestos por el metodo C. Conclusiones: La aplicacion de los metodos adecuados de preparacion de muestras, no solo para detectar el dopaje en atletas, sino tambien en el estudio del metabolismo de farmacos eliminados en la orina, define la cantidad y la calidad de la informacion obtenida. Bajo las condiciones del Laboratorio Antidoping de La Habana, una mejor deteccion del clobenzorex y sus metabolitos requiere de un paso de hidrolisis enzimatica y uno de formacion de derivados, en aras de obtener analitos con buenas condiciones cromatograficas al ser analizadas por la tecnica de CG-EM.