15-deoxy-△12,14-prostaglandin J2 induces anoikis of hepatocellular carcinoma cells: an in vitro experiment

目的 研究15-脱氧前列腺素J2(15-d-PGJ2)体外诱导人肝癌细胞系BEL-7402细胞失巢凋亡的特性,并探讨其机制.方法 在纤连蛋白(Fn)或多聚2-羟乙基甲基丙烯酸脂(poly-HEMA)包被的培养板中,应用光学显微镜观察不同因素处理后的细胞生长状态和形态学变化;应用DNA片段分析和流式细胞术观察细胞的凋亡变化;应用Western印迹技术观察细胞焦点黏着斑激酶(FAK)和磷酸化FAK(p-FAK)蛋白质的表达;应用小RNA干扰技术来沉默FAK基因.结果 在Fn包被的培养板中贴壁生长的BEL-7402细胞经15-d-PGJ2处理24 h或48 h后,细胞变圆,脱离细胞外基质呈悬浮状态改变,而且这种改变呈时间和剂量依赖性关系;其中以浓度为20 μmol/L的15-d-PGJ2最为显著,24 h和48 h时间点细胞的黏附比率分别为(66.0±3.6)%和(35.0±5.0)%,与肝癌细胞对照相比差异有统计学意义(P《0.05).经流式细胞术和DNA片段分析后发现肝癌细胞发生了失巢凋亡;Western印迹显示p-FAK蛋白下降,而FAK蛋白质表达水平未发生改变.结论 15-d-PGJ2在体外能够诱导BEL-7402细胞失巢凋亡,这一过程与细胞FAK磷酸化水平降低有关。