非神经元型胆碱能系统在(前)脂肪细胞的表达及nAChRα7功能状态对前脂肪细胞Visfatin基因表达的影响(英文)

原核生物、真核生物、植物体的非神经细胞和组织中，尤其是多种免疫活性细胞中，均证实乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）、胆碱乙酰转移酶（choline acetyltransferase，ChAT）和乙酰胆碱受体（acetylcholine receptor，AChR）各亚型在内的胆碱能系统组分的存在，其中烟碱样乙酰胆碱受体α7（nicotinic acetylcholine receptor α7，nAChRα7）是烟碱样胆碱能抗炎通路（nicotinic anti-inflammatory pathway）中重要的分子核心机制，同时也是机体限制宿主防御反应扩大的内源性抗炎机制之一.本文旨在探讨（前）脂肪细胞上非神经元型胆碱能系统是否存在及初步揭示烟碱样胆碱能受体α7对前脂肪细胞功能的影响.以体外培养的3T3-L1前脂肪细胞为研究对象，采用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术，分别检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中乙酰胆碱酯酶、胆碱乙酰转移酶和烟碱样乙酰胆碱受体α7的3种胆碱能系统主要组分的蛋白表达.另将前脂肪细胞分为给予广谱烟碱样乙酰胆碱受体激动剂尼古丁、特异性烟碱样乙酰胆碱受体α7激动剂氯化胆碱及特异性烟碱样乙酰胆碱受体α7拮抗剂甲基牛扁亭碱干预12 h、24 h、36 h，并设立相应处理时间的空白对照组，逆转录聚合酶链反应检测前脂肪细胞visfatin mRNA表达情况.免疫组化染色可见前脂肪细胞中AChE、ChAT及AChRα7均有阳性表达；蛋白免疫印迹检测进一步半定量证实了前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中AChE、ChAT及AChRα7的蛋白表达；拮抗剂甲基牛扁亭碱（10^-6-10^-4mol/L）时间、剂量依赖性上调前脂肪细胞visfatin mRNA表达（1.3-1.55-fold，P〈0.01），与对应空白对照组相比，存在显著性统计学差异；加入不同剂量的尼古丁和氯化胆碱，则前脂肪细胞中visfatin mRNA表达水平与对应空白对照组相比，均不同程度地下降，其中以氯化胆碱的抑制效应更为显