Evaluación de la susceptibilidad antimicrobiana y del tratamiento del calostro para el control de las infecciones por Mycoplasma agalactiae y Mycoplasma mycoides subsp. capri

RESUMEN Para la presente tesis doctoral se evaluaron los distintos metodos diagnosticos de mamitis en cabras lecheras asi como las condiciones previas al muestreo y las condiciones analiticas de la muestra. Todos los trabajos que conforman la tesis tienen como objeto principal de estudio el sindrome conocido como agalaxia contagiosa (AC) y su control. En concreto, el resto de trabajos publicados se centraron en la eficacia de algunas medidas de control de esta enfermedad en el ganado caprino, como lo son el manejo del encalostramiento y el uso de la terapia antimicrobiana frente a las dos principales especies causantes de AC en esta especie de abasto. Objetivos 1. Realizar una revision bibliografica donde se discuta la validez de los metodos diagnosticos disponibles para las mamitis caprinas y agalaxia contagiosa en cabras lecheras en funcion de la situacion epidemiologica de los rebanos 2. Realizar una revision donde se expongan los patogenos del ganado caprino potencialmente transmisibles mediante la ingestion del calostro, asi como los metodos disponibles para su inactivacion y las consecuencias que estos tienen sobre la calidad del calostro. 3. Estudiar la viabilidad de Mycoplasma agalactiae y Mycoplasma mycoides subsp. capri en el calostro caprino sometido a tratamiento termico o a la adicion de dodecil sulfato de sodio. 4. Evaluar la susceptibilidad in vitro a diferentes antimicrobianos de aislamientos caprinos de Mycoplasma agalactiae obtenidos de animales asintomaticos o con sintomatologia tipica de de agalaxia contagiosa. 5. Evaluar la susceptibilidad in vitro a diferentes antimicrobianos de aislamientos caprinos de Mycoplasma mycoides subsp. capri obtenidos de diferentes localizaciones anatomicas. 6. Comparar los resultados de susceptibilidad antimicrobiana de aislamientos caprinos de Mycoplasma mycoides subsp. capri obtenidos mediante dos metodos diferentes. 7. Estudiar la presencia de mutaciones en regiones determinantes de resistencia a quinolonas en aislamientos de campo de Mycoplasma mycoides subsp. capri con baja susceptibilidad a estos compuestos. Resultados y conclusiones 1. La pasteurizacion del calostro caprino a 56 oC o 60 oC reduce significativamente la concentracion de Mycoplasma agalactiae, y Mycoplasma mycoides subsp. capri se inactiva tras el tratamiento a 60 oC durante 60 minutos. 2. El tratamiento del calostro caprino con dodecil sulfato de sodio al 0,1 % o al 1 % durante 10 minutos es insuficiente para conseguir la inactivacion de Mycoplasma agalactiae o Mycoplasma mycoides subsp. capri. 3. Los antibioticos que se muestran mas eficaces frente a Mycoplasma agalactiae son las fluoroquinolonas, tetraciclinas y macrolidos, exceptuando dentro de este ultimo grupo la estreptomicina y la tilosina, a los que se parece ser resistente. 4. Los aislamientos de Mycoplasma agalactiae obtenidos de animales con clinica de agalaxia contagiosa presentan valores mas elevados de CMI90 para la mayoria de los antimicrobianos respecto de los obtenidos de animales asintomaticos. 5. La enrofloxacina, ciprofloxacina, marbofloxacina, danofloxacina, moxifloxacina, doxiciclina, tilosina y clindamicina son los agentes mas efectivos in vitro frente Mycoplasma mycoides subsp. capri. Los aminoglucosidos, la espiramicina y la eritromicina parecen no ser utiles en el tratamiento de la agalaxia contagiosa causada por Mycoplasma mycoides subsp. capri. 6. El test epsilometrico estima la concentracion minima inhibitoria en buena concordancia con el metodo de microdilucion para aquellos antimicrobianos con una concentracion minima inhibitoria baja, pero esta concordancia es menor cuando la concentracion minima inhibitoria, obtenida mediante el metodo de microdilucion, es intermedia o alta. 7. Se confirma por primera vez la presencia de mutaciones en regiones determinantes de resistencia a quinolonas del gen gyrA en aislamientos de campo de Mycoplasma mycoides subsp. capri. SUMMARY In the present doctoral thesis, the different diagnostic methods of mastitis in dairy goats, as well as the conditions of the sampling and the analytical conditions of the sample, were addressed. All the studies that conform the thesis have, as a main objective, the syndrome known as contagious agalactia (CA) and its control. Specifically, the rest of the published works focused on the efficacy of some control methods of this disease in goat herds, such as the management of the colostrum intake and the antimicrobial therapy against the two main etiological agents of caprine CA. Objectives 1. To review and discuss the validity of the available diagnostic methods for caprine mastitis and contagious agalactia in dairy goats, according to the epidemiological situation of the herds. 2. To review and explain the goat pathogens potentially transmissible through the colostrum intake, the available methods for their inactivation and their effects over the quality of colostrum. 3. To study the viability of Mycoplasma agalactiae y Mycoplasma mycoides subsp. capri in goat colostrum subjected to heat treatment or added with sodium dodecyl sulfate. 4. To study in vitro the antimicrobial susceptibility to different antimicrobials of caprine isolates of Mycoplasma agalactiae obtained from asymptomatic animals or showing signs of contagious agalactia. 5. To study in vitro the antimicrobial susceptibility to different antimicrobials of caprine isolates of Mycoplasma mycoides subsp. capri obtained from different anatomic locations 6. To compare the results of antimicrobial susceptibility of Mycoplasma mycoides subsp. capri caprine isolates, obtained by two different methods. 7. To study the presence of mutations in quinolone resistance determining regions in Mycoplasma mycoides subsp. capri field isolates showing a low susceptibility to these compounds. Results and conclusions 1. The pasteurization of goat colostrum at 56 oC or 60 oC significantly reduces the concentration of Mycoplasma agalactiae, and Mycoplasma mycoides subsp. capri is inactivated after 60 minutes at 60 oC. 2. The treatment of goat colostrum with sodium dodecyl sulfate at 0,1 % or 1 % for 10 minutes is insufficient to achieve the inactivation of Mycoplasma agalactiae or Mycoplasma mycoides subsp. capri. 3. The most effective antimicrobials against Mycoplasma agalactiae in vitro are fluoroquinolones, tetracyclines and macrolides, with the exception of erythromycin and spyramicin in the latter group, to which it seems to be resistant. 4. Mycoplasma agalactiae isolates obtained from animals with symptoms of contagious agalactia feature higher MIC90 values for most of the antimicrobials, with respect to those obtained from asymptomatic animals. 5. Enrofloxacin, ciprofloxacin, marbofloxacin, danofloxacin, moxifloxacin, doxycycline, tylosin and clindamycin are the most effective agents in vitro against Mycoplasma mycoides subsp. capri. Aminoglycosides, spiramycin and erithromycin seem not to be useful in the treatment of contagious agalactia caused by Mycoplasma mycoides subsp. capri. 6. The epsilometric test estimates the minimum inhibitory concentration in good agreement with the microdilution method for those antimicrobials with a low minimum inhibitory concentration, but the agreement decreases when this value, obtained by means of the microdilution method, is intermediate or high. 7. For the first time, it is confirmed the presence of mutations in quinolone resistance determining regions of the gene gyrA of Mycoplasma mycoides subsp. capri field isolates.