抗血管内皮生长因子受体1和2双靶向寡肽融合蛋白A7／G6-力达霉素辅基蛋白的构建及其抗血管生成活性

目的构建抗血管内皮生长因子受体1和血管内皮生长因子受体2双靶向寡肽融合蛋白A7／C6-力达霉素辅基蛋白并研究其抗血管生成活性及作用机制。方法构建抗血管生成寡肽A7、G6与力达霉素辅基蛋白的融合蛋白A7／G6-力达霉素辅基蛋白表达载体；利用亲和层析进行蛋白纯化，产物进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱法分析；酶联免疫吸附法和免疫细胞化学分析A7／G6-力达霉素辅基蛋白与内皮细胞的结合活性；CCK-8法检测A7／C,6-力达霉素辅基蛋白对人微血管内皮细胞-1增殖的影响；蛋白质印迹法分析A7／G6-力达霉素辅基蛋白对血管内皮生长因子信号通路影响；划痕法分析A7／G6-力达霉素辅基蛋白对人微血管内皮细胞-1迁移的影响；小管形成分析A7／G6-力达霉素辅基蛋白对人微血管内皮细胞-1血管生成的影响。结果成功获得A7／C,6-力达霉素辅基蛋白融合蛋白，产量20mg·L^-1培养基，纯度较高；A7／G6-力达霉素辅基蛋白具有与人微血管内皮细胞-1和人脐静脉内皮细胞结合的活性；较高浓度能够抑制人微血管内皮细胞-1的增殖；能抑制内皮细胞的迁移和体外血管生成；其作用机制是通过G6和A7抑制血管内皮生长因子信号通路中AKT蛋白的磷酸化引起的。结论针对血管内皮生长因子受体构建的双靶向寡肽融合蛋白A7／G6-力达霉素辅基蛋白具有抗血管生成的活性，为A7／G6-力达霉素辅基蛋白进一步体内活性研究和作为药物输送载体研究奠定了基础。