全长SOD2重组蛋白的可溶表达、纯化、稳定性与跨膜效应

超氧化物歧化酶(SOD)家族是保护细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧(ROS)毒性所必需的，含Mn 2+ 离子的超氧化物歧化酶(Mn-SOD，SOD2) 是其中最重要的一种。本研究合成了人源SOD2全基因序列，并将其插入带有GST的原核表达载体pGEX-4T-1中，成功构建了GST-SOD2融合蛋白表达质粒。然后，将重组质粒pGEX-4T-1-SOD2转化大肠杆菌BL21 (DE3)，用IPTG在25 ℃下诱导表达融合蛋白，得到可溶性GST-SOD2融合蛋白，经GST亲和树脂纯化得到比活为1 788 U/mg的纯蛋白，分子量约为46 kDa。利用凝血酶切去GST标签后经肝素亲和柱纯化得到了电泳纯的SOD2重组蛋白，该蛋白分子量约为25 kDa，与SOD2全长序列的理论分子量相符，比活为2 000 U/mg。两种重组SOD2蛋白在生理条件下都具有良好的SOD活性，且都具有显著的跨膜能力( P < 0.05)。这些工作为深入研究两种全长重组SOD2蛋白的结构与生物效应建立了基础。