ANÁLISE DAS ALTERAÇÕES INDUZIDAS PELA UREASE DE CANAVALIA ENSIFORMIS SOBRE O PERFIL ELETROFORÉTICO DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL E PERIFÉRICO DE BARATAS DA ESPÉCIE NAUPHOETA CINEREA

Atualmente baratas tem sido muito utilizadas como modelo para estudos cientificos na area de biomedicina. O baixo custo para a criacao desses animais, associado ao elevado potencial reprodutivo sao algumas das caracteristicas que as tornam uteis na pesquisa em biotecnologia. Alem disso, a restricao ao uso de vertebrados em pesquisas laboratoriais tambem favorece a implementacao de modelos biologicos com insetos como alternativa. Apesar de varios neurotransmissores ja terem sido identificados em insetos, aspectos relacionados as proteinas envolvidas na neurotransmissao central e periferica desses animais ainda carecem de um estudo detalhado. A urease de Canavalia ensiformis (Jack Bean Urease, JBU) e um composto natural que tem sido caracterizado como um agente inseticida. Assim, o objetivo desse trabalho foi analisar o perfil eletroforetico do cordao nervoso central e do musculo coxal de baratas da especie Nauphoeta cinerea em presenca e ausencia do JBU e identificar possiveis alteracoes induzidas por essa urease nessas estruturas. Nesse trabalho foram usadas baratas de ambos os sexos, adultos que foram alojadas em insetario com temperatura controlada (22-24C), com agua e racao a vontade. Nos experimentos com JBU (6 µg/g de animal) as baratas foram injetadas na terceira porcao abdominal (10µl) e mantidas em recipiente isolado por duas horas. Os experimentos foram feitos em triplicatas, usando-se cinco baratas para cada protocolo. O cordao nervoso ventral e o musculo coxal foram dissecados e homogeneizados em tampao TRIS 50mM (pH 7), EDTA 2mM e DTT 1mM, utilizando um sistema de agitacao ultrarapida com esferas metalicas. Os homogeneizados foram deixados em Triton X100 0,5% durante 10 minutos, em gelo, para a solubilizacao da membrana e a consequente liberacao de proteinas associadas. A dosagem de proteinas foi realizada utilizando o metodo de BCA. Aproximadamente 30µg de proteina/poco foram aplicadas em SDS PAGE 10%. O perfil eletroforetico do cordao nervoso ventral e musculo coxal foi visualizado atraves de coloracao com Comassie Blue. Proteinas de peso molecular entre 250KDa e 15KDa foram observadas nas duas estruturas em condicoes controle e tratado. O tratamento com o JBU induziu alteracoes no perfil eletroforetico quando comparado ao controle, principalmente no musculo coxal. Conclui-se que o perfil eletroforetico do cordao nervoso ventral e do musculo coxal de baratas da especie Nauphoeta cinerea demonstra a presenca de proteinas com diferentes pesos moleculares. O tratamento de baratas com a urease de Canavalia ensiformis induziu alteracoes no perfil eletroforetico do musculo coxal, sugerindo que a atividade desse peptideo esteja associada ao sistema neuromuscular do inseto.