猪链球菌2型中国强毒株05ZYH33 ofs 基因敲除突变株构建及其生物学特性研究

目的探究猪链球菌血清浑浊因子ofs基因在强致病性2型猪链球菌致病过程中的作用。方法利用同源重组基因敲除方法构建中间为壮观霉素抗性基因，两侧为ofs编码基因上、下游同源序列的基因敲除质粒，将构建好的质粒电转化入猪链球菌感受态，同源重组筛选ofs基因敲除突变株，通过组合PCR、Southern杂交和DNA测序对疑似突变株进行验证。生物学功能实验研究比较ofs突变株和野生株05ZYH33在革兰氏染色、菌落溶血活性、生长速率和毒力等方面的差异。结果组合PCR、Southern杂交和DNA测序结果均证实ofs基因敲除突变株05ZYH33△ofs构建成功，体外实验结果显示ofs基因缺失后菌株在革兰氏染色和菌落溶血活性及形态、生长速率等方面未发生改变，但小鼠毒力实验数据结果表明敲除突变株△ofs加的毒力降低。结论猪链球菌2型ofs基因与细菌的毒力相关，本实验构建的突变株05ZYH33 △ofs为进一步研究猪链球苗2型的致病机理奠定某础。