基于TLR4-NF-κB的柴胡黄芩水煎液抑制CCl 4 诱导大鼠肝星状细胞激活作用机制研究

目的探讨柴胡黄芩水煎液 (CQ) 对CCl 4 诱导肝星状细胞 (hepatic stellate cell，HSC) 激活的作用及机制。 方法取对数生长的HSC，在无血清培养基中培养24 h后，以1.5×10 9 ·L -1 浓度接种到培养板中过夜。实验分组如下：空白对照组 (无药物处理)，CCl 4 诱导组 (6 mmol·L -1 CCl 4 作用6 h)，给药组 (6 mmol·L -1 CCl 4 作用6 h后，再用400、500、600 mg·L -1 的CQ作用24 h)，TLR4阻断剂TAK-242、NF-κB阻断剂BAY 11-7082组 (6 mmol·L -1 CCl 4 作用6 h后，再用TAK-242 10 mol·L -1 、BAY 11-7082 2 mol·L -1 作用24 h)。处理之后，应用ELISA法检测培养基中透明质酸酶 (hyaluronidase，HA)、层黏连蛋白 (laminin，LN)、Ⅲ型前胶原 (procollagen Ⅲ，PCⅢ)、Ⅳ型胶原 (collagen type Ⅳ，Ⅳ-C) 浓度，RT-PCR方法检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptors 4，TLR4)、核转录因子κB (NF-κB) 基因的表达，应用Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB蛋白的表达。 结果研究发现，与CCl 4 干预组比较，CQ量效相关性降低CCl 4 诱导的HSC增殖。600 mg·L -1 的CQ可以明显降低HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及TLR4、NF-κB基因、蛋白的表达。NF-κB抑制剂TAK-242、BAY 11-7082也可降低CCl 4 造成的HSC增殖，HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及NF-κB基因、蛋白表达，不能下调TLR4基因、蛋白表达。 结论CQ可以抑制CCl 4 诱导的炎症因子基因、蛋白表达，减轻肝纤维化相关指标的含量，其作用机制可能与TLR4-NF-κB转录活性及蛋白活性相关，提示其在抗肝纤维中的作用及机制。