Efeito leishmanicida do óleo essencial de Vernonia brasiliana (L.) Druce (Asteraceae) em Leishmania infantum

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito leishmanicida do oleo essencial de Vernonia brasiliana (VBEO) em formas promastigotas de Leishmania infantum, seu mecanismo de acao e o efeito da sua associacao com a droga padrao miltefosina. Folhas de V. brasiliana foram coletadas na cidade de Santa Luzia, Maranhao, seguido de identificacao botânica e deposito de exsicata. As folhas foram secas e submetidas ao processo de hidrodestilacao, para obtencao do oleo essencial. A composicao quimica do oleo essencial foi determinada por cromatografia gasosa-espectrometria de massas (CG-MS). As quantidades relativas dos compostos isolados foram calculadas a partir das areas de pico da cromatografia gasosa. A atividade leishmanicida do oleo essencial foi avaliada em formas promastigotas de L. infantum e a citotoxicidade em macrofagos DH82 atraves do ensaio colorimetrico do MTT. Para identificacao de alteracoes ultraestruturais, formas promastigotas de L. infantum foram tratadas com o IC50 do oleo essencial e avaliadas por microscopia eletronica de transmissao. Variacoes no potencial de membrana mitocondrial, na producao de especies reativas de oxigenio e a analise de eventos apoptoticos foram determinados por citometria de fluxo. Para tal, parasitos tratados com o oleo essencial, na concentracao do IC50, foram incubados com os fluorocromos TMRE, H2DCFDA e Anexina/Iodeto de propidio (PI), respectivamente. A combinacao entre VBEO-miltefosina foi avaliada em formas promastigotas de L. infantum, pelo metodo do isobolograma modificado. Diferentes proporcoes das drogas foram testadas para calcular o indice de concentracao inibitoria fracionada e determinar a natureza da interacao. Os resultados foram analisados estatisticamente pelo teste de Kruskal-Wallis seguido do pos-teste de Dunn. As analises foram realizadas pelo software GraphPad Prism 7, com diferencas consideradas significativas quando p<0,05. O rendimento do oleo essencial foi de 0,1%. Os compostos majoritarios do oleo foram sesquiterpenos, sendo o 􀈕-cariofileno (21,47%) o principal deles. Os ensaios de atividade contra formas promastigotas apontaram IC50 de 39,01±1,080 μg/mL. A concentracao citotoxica (CC50) foi de 63,13±1,211 μg/mL, mostrando que o oleo e menos toxico para celulas do que para os parasitos. A atividade leishmanicida do oleo essencial foi evidenciada atraves das alteracoes estruturais visualizadas nas formas promastigotas, como aumento de volume mitocondrial, presenca de vesiculas na bolsa flagelar, descontinuidade da membrana nuclear, fragmentacao e condensacao do nucleo e perda de organelas citoplasmaticas. VBEO diminuiu o potencial de membrana mitocondrial, aumentou a producao de especies reativas de oxigenio em promastigotas de L. infantum, com consequente inducao de morte celular por apoptose tardia. A combinacao oleo essencial-miltefosina demostrou efeito antagonico, com indice de concentracao inibitoria fracionaria igual a 4,779. Este trabalho demonstra a atividade anti- Leishmania de VBEO contra promastigotas de L. infantum.