一个棉花锌结合蛋白质（ZnBP）基因的克隆及原核表达

为了解棉花锌结合蛋白的理化性质及结构特征,从已构建完成的棉花（湘棉18）腺体形成时期的cD-NA均一化文库中筛选出1个棉花锌结合蛋白质（Zinc binding protein,ZnBP）基因的全长cDNA序列。经过克隆、测序及序列分析,发现该片段包含1个完整开放阅读框,长654个碱基,编码217个氨基酸,蛋白质分子量为2.46×104,等电点为9.33。以湘棉18叶片DNA为模板,通过PCR扩增分离获得棉花ZnBP基因。经测序拼接,得到1 731 bp的棉花gDNA片段,编码区含有3个内含子。利用pET-28a（＋）载体,开展了该基因的原核表达研究,在37℃、异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）终浓度1 mmol/L、诱导时间8 h和转速150 r/min条件下,实现最优表达;SDS-PAGE凝胶电泳及Western blotting检测分析结果表明,蛋白表达正确。