Etude immuno-structurale de la lignée mégacaryocyto-plaquettaire dans des souris transgéniques et chez des patients recevant du c7E3, un traitement anti-agrégant

La megacaryocytopoiese est un processus de differenciation cellulaire conduisant a la production des plaquettes sanguines. Cette these a d'abord concerne l'etude immuno-ultrastructurale de la lignee megacaryocyto-plaquettaire par microscopie electronique. Sur ce theme, Christel Poujol a etudie la megacaryocytopoiese dans un modele de souris transgeniques pour lequel le gene de la thymidine kinase du virus de l'herpes est place sous le controle du promoteur du gene de la sous-unite alphaIIb de l'integrine alphaIIbbeta3, recepteur majeur de l'agregation plaquettaire. A la suite d'un traitement par le ganciclovir, on induit la destruction des cellules ayant une activite transcriptionnelle du gene de alphaIIb. Ce modele a ete mis au point par Diana Le Roux et ses collaborateurs au sein du laboratoire de Gerard Marguerie a Grenoble (Tropel et al., Blood 1997 ; 90 : 2995). Au cours de sa these, Christel Poujol a constate que le traitement de ces souris transgeniques affecte particulierement les megacaryocytes et aussi, de maniere moindre, les autres lignees hematopoietiques. On note la presence residuelle de cellules immatures Sca-1+ et CD34+, montrant l'expression du promoteur du gene d'alphaIIb dans des cellules pluripotentes primitives. A l'arret du traitement, la reprise de l'hematopoiese a ete observee, avec la presence augmentee des megacaryocytes dans la moelle, permettant l'observation de la migration des megacaryocytes a travers la barriere endotheliale et la liberation des proplaquettes dans le sinus medullaire. Dans une deuxieme partie, Christel Poujol a utilise le fait que alphaIIbbeta3 est la base des nouveaux medicaments anti-agregants tels que l'anticorps anti-IIb-IIIa : le c7E3 Fab, pour etudier les mecanismes impliques dans le trafficking des ligands lies aux recepteurs plaquettaires soit in vivo soit ex vivo. Grâce a la microscopie electronique et aux immunomarquages de cryo-sections de plaquettes de patients recevant ce traitement, elle a montre l'internalisation par voie d'endocytose du c7E3 dans les vesicules contenant la clathrine ainsi que sa presence dans de fins canaux penetrant de la surface vers l'interieur des plaquettes. L'accessibilite du c7E3 Fab aux megacaryocytes dans la moelle a egalement ete demontree.