AVALIAÇÃO DE POLIMORFISMOS DE NUCLEOTÍDEO ÚNICO NOS GENES P2X7 E TLR9 ASSOCIADOS À MANIFESTAÇÃO DA TOXOPLASMOSE CONGÊNITA EM CAMPOS DOS GOYTACAZES

O Toxoplasma gondii e um protozoario intracelular obrigatorio e a infeccao por esse patogeno e geralmente assintomatica em hospedeiros imunocompetentes. No entanto, pode causar infeccoes congenitas em fetos. Estudos geneticos tem fornecido esclarecimentos importantes sobre susceptibilidade a doencas infecciosas. Este estudo visa avaliar a relacao entre polimorfismos de nucleotideo unico (SNPs) nos genes P2X7 e TLR9 e manifestacao clinica da toxoplasmose congenita. Um total de 48 binomios mae-filho foram recrutados, sendo que ate o momento foram coletadas amostras de sangue de 20 binomios que aceitaram participar voluntariamente do estudo. Apos padronizacao para determinacao do melhor metodo de extracao de DNA, as amostras de sangue estao sendo submetidas a extracao de DNA pelo metodo fenol-coloroformio e o DNA extraido tem sido quantificado por nanodrop. Reacao de polimerase em cadeia (PCR) tem sido feita para avaliar a pureza das amostras de DNA antes de iniciar a genotipagem. Exames sorologicos tem sido realizados por protocolo de citometria de fluxo in house. Os SNPs a serem avaliados foram selecionados por uso do software Haploview v.4.2. Apenas 42% dos binomios mae–filho contatados aceitaram participar como voluntarios no projeto e/ou atenderam as exigencias para participacao no mesmo. Os individuos tem tido suas amostras de DNA extraido pelo metodo fenol cloroformio. O sucesso da extracao tem sido inicialmente observado por geis de agarose que tem apresentado bandas consistentes e sem arraste, indicando que este metodo e um bom metodo para extracao de DNA a partir de amostras de sangue total congeladas, e nao somente frescas. Os mapas de desequilibrio de ligacao obtidos no haploview tem indicado a necessidade de se genotipar todos os SNPs selecionados devido os mesmos nao estarem em completo desequilibrio de ligacao. O metodo de extracao de DNA ideal para amostras congeladas foi fenol-cloroformio. Os SNPs a serem tipados foram determinados. Intenciona-se aumentar o numero de binomios para ao menos o dobro do que se tem ate o momento de modo a obter um maior poder estatistico nas analises a serem feita a seguir.