Vpliv kombiniranega delovanja citostatikov na živost celic ZFL in nastanek poškodb DNA

Citostatiki, ki se uporabljajo za zdravljenje raka, z urinom in/ ali blatom rakavih bolnikov pridejo v odpadne vode, in se posledicno v primeru, da le-te niso ustrezno preciscene, znajdejo v okolju. Zaradi specificnega mehanizma delovanja lahko citostatiki že v zelo nizkih koncentracijah predstavljajo nevarnost za netarcne organizme, s katerim pridejo v stik v okolju. V magistrski nalogi smo raziskovali citotoksicno in genotoksicno delovanje izbranih citostatikov in njihovih kompleksnih mesanic pri koncentracijah, ki so relevantne za okolje na in vitro modelu jetrnih celic rib cebric (Danio rerio; ZFL). Na osnovi literaturnih podatkov o pojavljanju citostatikov v odpadnih vodah Onkoloskega instituta v Ljubljani smo izbrali stiri, ki so eni od najpogosteje uporabljenih citostatikov in so tudi najpogosteje zaznani v odpadnih vodah. Izbrali smo naslednje citostatike: 5-fluorouracil (5-FU), cisplatin (CDDP), ciklofosfamid (CP) in ifosfamid (IF). Citotoksicno delovanje posameznih citostatikov in njihovih kompleksnih mesanic smo ugotavljali s testom MTS, njihovo genotoksicno delovanje pa s testom komet in testom mikrojeder. S testom MTS smo ugotovili od koncentracije in casa odvisen vpliv 5-FU in CDDP na živost celic, medtem ko CP in IF pri koncentracijh ≤ 150 mg/L nista znacilno vplivala na živosti celic ZFL niti po daljsem casu izpostavitve (72 ur). Kompleksna mesanica stirih citostatikov pri okoljskih koncentracijah (0.9 µg/L 5FU, 6 µg/L CDDP, 120 µg/L CP in 100 µg/L IF) ni vplivala na živost celic, medtem ko smo pri kompleksni mesanici, ki je vsebovala 10-krat visje koncentracije citostatikov, zaznali statisticno znacilen vpliv na živost celic ZFL, ki pa v primerjavi s kontrolo ni bila znižana za vec kot 30 %. Po 72 urah izpostavitve so cisti citostatiki povzrocili poskodbe DNA, kar smo ugotavljali s testom komet. LOEC (iz angl low observed effect concentration) vrednosti za posamezne citostatike so bile 0.01 mg/L za 5-FU, 0.1 mg/L za CDDP, 1 mg/L za CP in 0.01 mg/L za IF. Rezultati so pokazali, da je kompleksna mesanica povzrocila od koncentracije odvisno povisanje poskodb DNA. Medtem ko pri testiranih koncentracijah cistih citostatikov (≤ 1 mg/L za 5-FU in CDDP ter ≤ 10 mg/L za CP in IF) kot tudi pri kompleksnih mesanicah nismo zaznali vpliva na genomsko stabilnost celic ZFL, kar smo ugotavljali s testom mikrojeder. Rezultati nakazujejo, da kompleksne mesanice citostatikov lahko predstavljajo nevarnost za vodne organize pri okoljsko relevantnih koncentracijah, kot tudi potrjujejo dejstvo, da ne moremo negativnih ucinkov kompleksnih mesanic predvideti na podlagi toksikoloskih podatkov za posamezne ciste snovi, ki se v taksni mesanici nahajajo.