ScFv（3G11）-mms13融合基因克隆及表达载体构建

目的通过重叠延伸拼接PCR（SOE-PCR）技术克隆融合基因ScFv（3G11）-mmsl3并构建融合蛋白表达载体pET30a（＋）-ScFv（3G11）-mmsl3 ，为重组制备肿瘤靶向细菌磁小体提供转基因体载。方根法据mmsl3基因和SeFv（3G11）基因的序列，设计以PCR引物，以克隆载体pMD18-mmsl3和pMDl8-ScFv为模板，采用SOE-PCR技术构建融合基因ScFv-Linker-mmsl3。进而将融合基因ScFv-mmsl3与pET30a（＋）连接构建重组表达载体pET30a（＋）-ScFv-mmsl3，测序后应用软件DNAMAN进行分析。结果应用重叠延伸拼接PCR方法构建融合基因ScFv-linker-mmsl3（1158bp），然后通过克隆技术得到重组质粒pMD18-ScFv-mmsl3。将融合基因ScFv-Linker-mmsl3插入到pET30a（＋）构建了重组表达载体pET30a（＋）-ScFv-mmsl3；菌落PCR、酶切、DNA测序鉴定结果均表明目的片段准确地插入到表达载体中。结论通过SOE—PCR技术扩增了预先设计的长达1158bp的融合基因片段ScFv-Linker-mmsl3，并成功构建了重组质粒pMD18-ScFv-mmsl3及重组表达载体pET30a（＋）-ScFv-mmsl3，为磁小体用于肿瘤靶向治疗研究提供了实验材料。