Avaliação da resistência aos inibidores de tirosinoquinases em pacientes com leucemia mieloide crônica pela pesquisa de mutações do gene BCR-ABL e análise do perfil de expressão gênica de pacientes tratados com imatinibe e dasatinibe

O uso de inibidores de tirosinoquinases (TKIs) tem demonstrado eficacia no tratamento da Leucemia Mieloide Cronica (LMC). Porem, o fenomeno da resistencia e um importante problema na pratica clinica e ainda nao esta completamente elucidado. Alem da presenca de mutacoes no dominio quinasico (DQ) do gene BCR-ABL, diversos mecanismos moleculares foram relacionados a resistencia aos TKIs. Adicionalmente, alguns estudos tem sido realizados com o objetivo de identificar assinaturas de expressao genica associadas a resistencia citogenetica primaria ao imatinibe (IM). Ate o momento, a expressao de transcritos sem potencial codificador, mais especificamente de RNAs nao codificadores longos (lncRNAs), ainda nao foi investigada neste aspecto. LncRNAs, transcritos especialmente de regioes intronicas, tem sido apontados recentemente como possiveis reguladores da expressao genica em celulas normais e cancerosas. O objetivo geral deste estudo foi avaliar possiveis mecanismos de resistencia ao tratamento com TKIs em pacientes com LMC, atraves da pesquisa de mutacoes no DQ do gene BCR-ABL e da identificacao de genes codificadores e lncRNAs intronicos diferencialmente expressos entre pacientes responsivos (R) e nao responsivos (NR) ao IM e dasatinibe. A pesquisa de mutacoes realizada pela tecnica de sequenciamento direto revelou que 37% (26/71) dos pacientes avaliados apresentavam mutacoes, sendo as mais frequentes T315I (25%), M244V (18%) e E255K/V (14%). As taxas de Sobrevida Global (SG) (p = 0,008), Sobrevida Livre de Progressao (p = 0,03) e Sobrevida Livre de Evento (SLE) (p = 0,006) foram menores para os pacientes com mutacoes. SG (p = 0,04) e SLE (p = 0,03) foram significativamente menores para os pacientes com a mutacao T315I. A identificacao de perfis de expressao genica por microarranjos foi realizada a partir de amostras de celulas mononucleares de sangue periferico de 7 e 21 pacientes, respectivamente, para os estudos envolvendo dasatinibe e IM. Duas plataformas de microarranjos (Agilent Technologies) foram utilizadas neste estudo; a primeira com sondas que mapeiam exclusivamente em genes codificadores de proteina e a segunda, customizada, com 44.000 elementos que mapeiam em regioes intronicas e exonicas de mesmo locus. As analises estatisticas foram realizadas com as tecnicas Significance Analysis of Microarrays e patient leave-one-out cross-validation. Genes codificadores de proteina e lncRNAs diferencialmente expressos foram identificados a partir de comparacoes de tres subgrupos de amostras de R e NR, pre e pos-tratamento. Em seguida, cada conjunto de transcritos diferencialmente expressos foi analisado atraves do programa Ingenuity Pathway Analysis (IPA) para a identificacao de funcoes biologicas, redes genicas e vias canonicas significativamente enriquecidas. Entre os transcritos encontrados como diferencialmente expressos entre R e NR estao ABCF2, PAWR, ncCD44, ncTNFAIP8 e ncFOXO3A no estudo com dasatinibe e LEF1, BCL2, FYN, ncPXN, ncNCAM1 e ncRASEF no estudo com IM. Porem, no estudo com IM, os conjuntos de transcritos diferencialmente expressos nao distinguiram totalmente os casos R e NR. O presente trabalho identificou transcritos diferencialmente expressos entre amostras de pacientes R e NR tratados com dasatinibe e MI e sugere que lcnRNAs possuem um importante papel nos mecanismos moleculares de resistencia. Futuras investigacoes serao necessarias para a confirmacao destes achados. Abstract