Efeito da Concentração de 2-B-Mercaptoetanol na Extração de DNA de Erythrina Crista-Galli L.

A Erythrina crista-galli L., conhecida como corticeira-do-banhado, e uma especie arborea de porte medio, caracteristica do bioma Pampa. O interesse por seu cultivo baseia-se na sua utilizacao ornamental e seu potencial para recuperacao de ecossistemas de solos alagadicos, inclusive em areas de baixas temperaturas. Estudos mostram que o isolamento de DNA total a partir de folhas e câmbio vascular em E. crista-galli indicaram contaminacao por polissacarideos e polifenois, o que reduz a qualidade do DNA isolado. O 2-β-mercaptoetanol e um reagente antioxidante usado para neutralizar acao desses contaminantes. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo testar diferentes concentracoes de 2-β-mercaptoetanol para extracao de DNA de Erythrina crista-galli , verificando seu efeito na quantidade e qualidade de DNA isolado. Para esse trabalho foram utilizadas 6 (seis) sementes de E. crista-galli , coletadas no municipio de Livramento-RS e transportadas para a Universidade Federal do Pampa - Campus Sao Gabriel, onde foram cultivadas ex vitro ate que as plântulas atingissem cerca de 20 cm de altura. Apos, uma plântula com aproximadamente 200 mg de cobertura foliar foi selecionada e dividida em 5 (cinco) testes, sendo o controle com kit de extracao de DNA (DNeasy Plant Mini Kit) da marca Qiagen seguindo o protocolo do fabricante. Esse kit foi utilizado como controle por se valer de filtros fisicos e quimicos para remocao das impurezas do DNA. Para as demais amostras, a extracao de DNA foi realizada com protocolo CTAB 2% (“Cationic hexadecyl trimethyl ammonium bromide”) com adicao de diferentes concentracoes de 2-β-mercaptoetanol (0%, 1%, 3% e 5%). O DNA extraido foi quantificado por espectrofotometria utilizando o equipamento Nanoview® e sua qualidade foi verificada por eletroforese em gel de agarose 0,8%. Dentre os protocolos testados para extracao de DNA, observou-se atraves de espectrofotometria, que ao utilizar o protocolo controle (kit Qiagen) e o CTAB 2% (concentracao de 3% de 2-β-mercaptoetanol) obteve-se as maiores quantidades de DNA de E. crista-galli , com o total de 37 ng e 47 ng, respectivamente, evidenciando alta concentracao de DNA em gel de agarose. Quanto aos protocolos compostos por CTAB 2%, pode-se inferir que a concentracao de 2-β-mercaptoetanol tem influencia direta na quantidade de DNA obtida. Isso porque, os protocolos que utilizaram concentracoes maiores ou menores que 3% desse reagente obtiveram quantidades inferiores a 22 ng de DNA. Assim, conclui-se que o protocolo de extracao de DNA que obtem melhor qualidade e maiores quantidades DNA de E. crista-galli L. e o CTAB 2% com concentracao de 3% de 2-β-mercaptoetanol, sendo inclusive, superior ao protocolo controle (kit Qiagen). Este trabalho servira de base para futuras pesquisas em genetica de populacoes de Erythrina crista-galli L.