尼罗罗非鱼 Xbp1-S 基因克隆及表达分析

为了了解尼罗罗非鱼( Oreochromis niloticus )细胞转录因子 Xbp1-S ( OnXbp1-S )的基因序列特征及其在无乳链球菌( Streptococcus alactolyticus )应激和在B细胞分化中的作用，应用RACE克隆技术获得的 OnXbp1-S 基因全长1380 bp，包括开放阅读框ORF为1155 bp，5’端非编码区(5’ UTR)长127 bp，3’端非编码区(3'UTR)长98 bp。 OnXbp1-S 序列分析推测该基因编码384个氨基酸，分子量为41.32 kDa，理论等电点为4.36。同源性分析显示， OnXbp1-S 基因与其他鱼类的聚为一支，其中，与南极鳕( Notothenia coriiceps )相似性最高。荧光定量PCR及Western-blot结果显示，OnXbp1-S在各组织中均有表达，mRNA水平上在肝脏中表达量最高，蛋白水平上在胸腺中表达量最高，而在肌肉中表达量最低。无乳链球菌应激后， OnXbp1-S 基因在肝脏和脾脏中的表达趋势相似，均在应激期间出现表达量上调，在192 h出现峰值。另外，免疫组化分析发现， OnXbp1-S 因子在不同分化程度B细胞亚类中的表达呈现差异，在成熟B细胞中呈现高表达，而在未成熟B细胞中几乎不表达。研究结果表明， OnXbp1-S 参与尼罗罗非鱼对无乳链球菌的免疫防御，和在B细胞分化中起作用。本研究将为进一步研究 OnXbp1-S 因子应答病原菌侵染的机理及促进B细胞分化机制提供理论依据。