Fator de Transcrição Rfx1 atua na diferenciação celular neurogênica de células-tronco mesênquimais de medula óssea.

Introducao: O potencial neurogenico das celulas tronco mesenquimais (MSCs), quando cultivadas in vitro, as transformam numa ferramenta valiosa para o tratamento de doencas neurologicas substituindo o tecido neuronal danificado apos o surgimento deste tipo de doencas. Visando entender as modificacoes que acontecem no perfil de expressao genica durante a diferenciacao das MSC em celulas neuronais Tondreau e cols. (2008) estudaram estes eventos atraves de microarray. Neste trabalho foi detectada a expressao diferencial de 1943 genes, chamando a atencao a diminuicao na expressao de genes adipogenicos, condrogenicos e osteogenicos e aumento dos genes envolvidos em neurogenese. Porem, ainda ha muito a ser feito para desvendar os mecanismos gerais que conduzem o processo de diferenciacao para poder direcionar compostos especificos que induzam a diferenciacao neurogenica durante os protocolos de terapia celular. Materiais e metodos: Neste estudo, nos realizamos a analise in silico das regioes promotoras dos genes diferencialmente expressos apresentados no artigo supra-citado. As regioes promotoras (regioes -500 a +500) de todos os genes foram obtidas manualmente a partir da base de dados do genoma humano do NCBI. Foram analisadas quanto a presenca de sitios de ligacao de fatores de transcricao conhecidos atraves do uso da ferramenta TESS e os resultados obtidos em formato xls foram analisados com um MACRO de Excel desenvolvido pelo nosso grupo de pesquisa, que detecta sitios de ligacao de fatores de transcricao diferencialmente representados em gene co-expressos. Foram considerados estatisticamente significante aqueles dados com valor de p < 0,05. A ferramenta TESS utiliza diversos metodos estatisticos nas suas analises e o MACRO usa o metodo de chi quadrado em tabela de contingencia com um grau de liberdade. Resultados: Apos submissao das sequencias a ferramenta TESS e posterior analise com MACRO de Excel um unico fator de transcricao se mostrou relevante. Sendo este fator o RFX1 (regulatory factor X 1) que apresentou um valor de p=0,04. A familia RFX e caracterizada por sitios de ligacao no DNA altamente conservado de 18pb e o grupo e conservado ao longo da evolucao em eucariotos. Caenorhabiditis elegans sem o gene homologo de Rfx possue severos defeitos sensoriais. Encontramos relacoes diretas de Rfx1 com o gene promotor FGF1(fibroblast growth factor 1) que atua na regulacao da neurogenese sendo que a variante FGF-1B e majoritariamente transcrita no cerebro humano, e a RFX1 pode se ligar na sua regiao promotora. A super-expressao de RFX1 regula negativamente a formacao da variante FGF1B mRNA e a formacao de neuroesferas em humanos, entretanto o RNAi knockdown de RFX1 demonstra o efeito contrario. Conclusao: O fator de transcricao RFX1 pode ter um papel muito importante na diferenciacao neurogenica das celulas tronco mesenquimais. Por este motivo, novos estudos deverao ser realizados neste sentido para comprovar os dados obtidos in silico