报告基因系统HSV1-sr39tk/FIAU监测治疗基因表达的体外研究

构建HSV1-sr39tk为报告基因，以VEGF165为治疗基因的重组腺病毒载体Ad5-sr39N-IRES-VEGF165（Ad5-SIV），将其以不同感染复数（MOI=0、10、25、50、75、100）感染大鼠骨髓间充质干细胞，用免疫激光共聚焦技术检测HSV1-sr39tk与VEGF165的表达。用酶联免疫吸附试验（ELISA）监测感染病毒后细胞培养上清中VEGF165蛋白分泌量；细胞摄取131I-FIAU实验监测HSV1-sr39tk报告基因的表达情况，以腺病毒包装增强型绿色荧光蛋白（Ad5-EGFP）为对照。结果显示：免疫共聚焦显微镜可观察到HSV1-sr39tk蛋白与VEGF165蛋白在细胞内成功表达；VEGF165蛋白分泌情况与MOI间呈线性正相关（P〈0．05）；感染Ad5-SIV后细胞对131I-FIAU摄取率增高与MOI间呈线性正相关（P〈0．05）。不同时间摄取实验结果显示：30—150min间细胞摄取率迅速增高，之后增高减慢，进入平台期。MOI相关摄取结果与MOI相关ELLISA结果具有较好相关性（P〈0．05）。Ad5-SIV经感染后可在大鼠骨髓间充质细胞中成功表达，并且治疗基因VEGF与报告基因HSV1-sr39tk的表达呈正相关，说明可通过报告基因HSV1-sr39tk监测治疗基因VEGF165的表达，为动物水平报告基因显像提供理论支持。