Caracterización de NF-КB en cáncer de mama: posible factor pronóstico y predictivo

La activacion del factor de transcripcion NF-kB juega un papel importante en el proceso de la oncogenesis. El proposito del presente estudio fue determinar si NF-kB se encuentra activado en cancer de mama e identificar la correlacion de su actividad con las caracteristicas clinico-patologicas del tumor. Ademas, se analizaron aquellos genes cuya expresion esta regulada por NF-kB en tejido tumoral, tejido adyacente al tumor y tejido normal procedente de reducciones mamarias. Finalmente se estudio si NF-kB o alguno de sus genes diana podria tener un papel en el tratamiento del cancer de mama. Para el estudio de la activacion de NF-kB se utilizaron muestras de tejido congelado procedentes de cirugia que fueron incluidas en OCT (compuesto para la temperatura optima de corte) y a las que se les realizo un analisis histopatologico para comprobar la calidad. De las 450 muestras que analizamos, seleccionamos 148 muestras de carcinoma mamario y 16 de tejido adyacente no tumoral. Se obtuvieron los extractos proteicos de todas ellas y la determinacion de la activacion de las cinco subunidades de NF-kB se realizo mediante ELISA y se valido mediante western blot. Para la determinacion de la expresion genica utilizamos tejido parafinado. Se extrajo el ARN y se realizo la transcripcion inversa. La calidad de la muestra se determino mediante el kit comercial “RT2 RNA QC PCR array”. El perfil genico se realizo con “RT2 Profiler PCR Array Human NF-kB Signaling Targets”. La sensibilidad al tratamiento con el farmaco quimioterapico doxorubicina se realizo con las lineas celulares derivadas de carcinoma mamario MCF7, MDAMB231, MDAMB468, SKBR3 y BT474. La activacion de NF-kB inducida por la doxorubicina se evaluo dichas lineas celulares, realizandose tambien la comparacion de la expresion genica antes y despues del tratamiento. Se observo que las subunidades de NF-kB p65, p50, p52 y relB se encuentran activadas de forma significativa en tejido tumoral frente a tejido no tumoral, siendo el valor-p ? 0,005 en todos los casos. Ademas, en carcinoma ductal invasivo la activacion de relB estaba asociada al tamano tumoral (p=0,004), la invasion de tejidos adyacentes (p=0,01) y afectacion ganglionar (p= 0,003) mientras que el aumento de la activacion de la subunidad p65 estaba asociado a invasion linfatica (p=0,033). Asimismo los niveles de activacion de p52 y c-rel fueron mas altos en carcinoma ductal invasivo que en carcinoma ductal in situ con valores-p de 0,008 y p=0,019 respectivamente. Por otra parte, valores de activacion altos para p52 y relB en tumores positivos para receptores de estrogenos estuvieron significativamente asociados a recidiva tras el tratamiento. Respecto al analisis de expresion de genes diana de NF-kB, encontramos diferencias significativas entre la expresion de tejido normal/adyacente y tumoral en los genes CXCL10, CXCL9, MMP9 y LTA cuya expresion fue mayor en tejido tumoral y MYC, EGFR y MAP2k6 cuya expresion disminuia. Tambien observamos que la expresion de MMP9, CXCL9 y MYC en tejido adyacente al tumor estaba aumentada respecto a tejido normal. En lineas celulares observamos que el tratamiento con doxorubicina producia la activacion de NF-kB y de la expresion de genes asociados a actividades quimocina y citocina, senalizacion intercelular y respuesta inflamatoria mientras que la expresion de genes relacionados con actividades anti-apoptoticas y transduccion de senales estaba disminuida. Estos datos indican que NF-kB esta constitutivamente activado en cancer de mama y sugiere que la actividad de NF-kB esta asociada con la progresion tumoral y la supervivencia libre de enfermedad. Por otro lado, algunos genes asociados a NF-kB con expresion diferente entre tejido tumoral y normal podrian actuar como dianas terapeuticas potenciales en cancer de mama ya que su expresion se modifica tras el tratamiento con doxorubicina. Finalmente se sugiere que el microambiente tumoral podria tener un papel destacado en la progresion del cancer y la resistencia a farmacos.