坝上长尾鸡 pmel 基因核心启动子的鉴定

为探明坝上长尾鸡的前黑素小体蛋白(Pre-melanosomal protein，Pmel)基因核心启动子区，首先构建了双荧光素酶表达载体，通过脂质体瞬时转染鸡胚成纤维细胞DF1，并利用双荧光素酶检测试剂盒进行启动活性检测。成功克隆了坝上长尾鸡 pmel 基因5´侧翼区片段1 268 bp，预测启动子区(-1 200–+68)含有2个CpG岛和多种转录因子结合位点，构建了9个含有不同长度 pmel 基因启动子片段的表达载体及1个核心启动子区突变载体，说明鸡 pmel 基因启动子的核心区域为-840–+68 bp，其中-840–-590 bp和-525–-266 bp区域为正调控区，-590–-525 bp区域为负调控区，多态位点(-456、-435、-410、-374和-341)对 pmel 基因启动子活性有较大影响。