Muscleblind-like-1 (MBNL1) is a splicing regulatory factor controlling the fetal-to-adult alternative splicing transitions during vertebrate muscle development. Its capture by nuclear CUG expansions is one major cause for type 1 myotonic dystrophy (DM1). Alternative splicing produces MBNL1 isoforms that differ by the presence or absence of the exonic regions 3, 5, and 7. To understand better their respective roles and the consequences of the deregulation of their expression in DM1, here we studied the respective roles of MBNL1 alternative and constitutive exons. By combining genetics, molecular and cellular approaches, we found that (i) the exon 5 and 6 regions are both needed to control the nuclear localization of MBNL1; (ii) the exon 3 region strongly enhances the affinity of MBNL1 for its pre-mRNA target sites; (iii) the exon 3 and 6 regions are both required for the splicing regulatory activity, and this function is not enhanced by an exclusive nuclear localization of MBNL1; and finally (iv) the exon 7 region enhances MBNL1-MBNL1 dimerization properties. Consequently, the abnormally high inclusion of the exon 5 and 7 regions in DM1 is expected to enhance the potential of MBNL1 of being sequestered with nuclear CUG expansions, which provides new insight into DM1 pathophysiology.
L'objet de ce memoire est de mener une reflexion sur les enjeux de l'optimisation de la documentation process au sein d'une societe bancaire, dans le cadre d'un projet de management par processus. Il s'agit de comprendre les enjeux de la formalisation des processus, de la gestion des connaissances qui sont des notions cles au moment de deployer un projet de management par processus. Il s'agit aussi de montrer les enjeux d'une gestion documentaire de qualite puisque le management par processus appartient au domaine de la gestion de la qualite. Or, une gestion documentaire optimum est un facteur cle de demarche qualite pour une organisation.
Une alteration de l’epissage alternatif est impliquee dans certaines pathologies telles que la Dystrophie Myotonique de type 1 (DM1). La DM1 est une maladie genetique multisystemique appartenant a la famille des maladies a expansion de triplets. En effet, bien que non traduites, les expansions CUG localisees en 3’ des transcrits DMPK repriment l’exportation nucleaire de ces transcrits. Ce phenomene entraine notamment une deregulation de l’activite de plusieurs facteurs regulateurs d’epissage parmi lesquels les familles CELF (CUGBP and ETR-3 like factor) et MBNL (MuscleBlind like). Cette deregulation aboutit a un defaut d’epissage alternatif de nombreux transcrits, en particulier dans les muscles squelettiques, le cœur et le cerveau. On compte parmi ces transcrits deregules celui du gene MAPT codant pour les proteines Tau. Six isoformes de Tau, issues de l’epissage alternatif des exons 2, 3 et 10, sont principalement exprimees dans le cerveau adulte humain. Dans le cerveau DM1, ces exons sont preferentiellement exclus.La regulation et la deregulation de l’epissage alternatif de l’exon 2 de Tau dans la DM1 peuvent etre etudiees via l’utilisation de minigenes. Ces minigenes sont constitues de sequences Tau plus ou moins deletees inserees dans un vecteur plasmidique. Nous avons demontre que la nature de ce vecteur a une influence sur l’epissage. La construction de differents minigenes a donc permis de selectionner celui le plus adapte a la recherche des sequences cis regulatrices de Tau. L’etude de ces minigenes demontre l’existence d’elements cis represseurs eloignes de l’exon, entre les nucleotides +500 et +2100 en aval de l’exon 2. Par contre, les elements cibles par les repetitions CTG dans la DM1 sont proximaux a l’exon 2, dans les 250 pb de part et d’autre de l’exon. Dans ces expansions CTG peuvent etre sequestres certains facteurs d’epissage tels que ceux de la famille MBNL. Dans notre modele cellulaire, l’extinction de l’expression de MBNL1 ou l’utilisation de minigenes mutants MBNL demontrent que ces facteurs sont impliques dans la regulation et la deregulation de l’epissage de l’exon 2 de Tau. De plus, la surexpression de MBNL2 restaure un epissage normal de l’exon 2 en presence de la mutation DM1. Cette restauration est augmentee lorsque MBNL1 est egalement surexprime suggerant un effet synergique de ces deux facteurs. Par la suite, nous avons etudie l’intervention d’autres familles de facteurs ubiquitaires ou impliques dans les pathologies a expansion de triplets. Les facteurs conduisant a la deregulation de l’exon 10 dans la DM1 n’etant que tres peu connus, l’epissage du transcrit de Tau endogene a ete analyse afin d’etudier a la fois les exons 2 et 10. Ainsi, de nouveaux facteurs impliques dans la regulation de l’exon 2 (CELF2, 4 et 6, PTB1 et 2, Sam68, MBNL2) et de l’exon 10 (Sam68, MBNL2, Fox 1 et 2) ont ete identifies. Pour la premiere fois, l’implication des facteurs CELF5, SC35, SRp20, SRp75, 9G8 pour l’exon 2 et CELF3, hnRNPA1 et Fox1 pour l’exon 10 dans la restauration d’un epissage normal en presence de la mutation DM1 a ete identifiee. En conclusion, les exons 2 et 10 de Tau, bien que tous deux deregules dans la DM1, sont regules et deregules de facon differente.
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Sperm motility notably depends on the structural integrity of the flagellum and the regulation of microtubule dynamics. Although researchers have started to use “omics” techniques to characterize the human sperm's molecular landscape, the constituents responsible for the assembly, organization, and dynamics of the flagellum microtubule have yet to be fully defined. In this study, we defined a core set of 116 gene products associated with the human sperm microtubulome (including products potentially involved in abnormal ciliary phenotypes and male infertility disorders). To this end, we designed and applied an integrated genomics workflow and combined relevant proteomics, transcriptomics, and interactomics datasets to reconstruct a dynamic interactome map. By further integrating phenotypic information, we defined a disease-interaction network; this enabled us to highlight a number of novel factors potentially associated with altered sperm motility and male fertility. Lastly, we experimentally validated the expression pattern of two candidate genes (CUL3 and DCDC2C) that had never previously been associated with male germline differentiation. Our analysis suggested that CUL3 and DCDC2C’s products have important roles in the sperm flagellum. Taken as a whole, our results demonstrate that an integrated genomics strategy can highlight relevant molecular factors in specific sperm components. This approach could be easily extended by including other “omics” data (from asthenozoospermic men, for example) and identifying other critical proteins from the human sperm microtubulome.
Afin de realiser ma mission, l'objet de mes recherches tourne autour de differentes interrogations : dans quel contexte a eu lieu le projet d'installation de l'espace culturel Evasion et en particulier celui de la mediatheque Francois Mitterrand.
The mis-splicing of Tau is instrumental to the development of neurofibrillary degeneration (NFD) naturopathies such as FTDP-17 in which MAPTmutations lead to a defective splicing of Tau. A mis-splicing of Tau is also observed in the brain and muscle of patients affected by myotonic dystrophy of type I (DM1). Moreover, this Tau mis-splicing is associated with the development of NFD. DM1 is a neuromuscular disease characterized by an unstable CTG expansion. This mutation is responsible for a toxic gain of RNA-function, leading to the gain or loss of function of several splicing factors, including the CELF and MBNL families, respectively. It ultimately leads to an indirect mis-splicing of numerous transcripts. In regards to Tau mis-splicing, exon-2 inclusion is highly decreased in DM1 brains. In contrast, a mis-splicing of Tau exon-10 is seldom observed in DM1 but the mechanisms triggering this mis-splicing event remain unknown. We herein aimed to gain further insights into these molecular mechanisms involved in normal and pathological splicing of Tau exons 2 and 10 using cell-based models. Two among the brains of 5 DM1 patients showed an exon-10 mis-splicing whereas exon-2 inclusion was reduced in all DM1 patients. The over-expression of long stretches of CTGrepeats promoted the exclusion of both Tau exon 2 and exon 10. Interestingly, MBNL1 loss of expression efficiently repressed Tau exon 2 inclusion but failed to modulate Tau exon-10 splicing. Analyzing the splicing functions of three major CELF splicing factors, we showed that CELF 4 acts as a repressor for exon-2 or as an enhancer for exon-10 inclusion. In sharp contrast, CELF2 repressed both exons 2 and 10 inclusions whereas CELF1 was inefficient to modulate Tau splicing. In addition, 2D electrophoresis coupled to western-blotting suggest a possible change inbrain CELF2 activity induced by its hyperphosphorylation in DM1. Altogether, we showed that MBNL1 and CELF2 are implicated in the mis-splicing of Tau-exons 2 and 10, respectively, but not CELF1. Moreover, our Tau splicing study also suggests that two different mechanisms may contribute to the mis-splicing of several targets in DM1.
