V nasem experimentu jsme studovali růst a vývoj explantatove
kultury raných somatických embryi smrku ztepileho (Picea
abies), ktera vytvaři shluky. Růst shluků raných somatických
embryi (SRSE) je ovlivněn procesem pasažovani. Pomoci metody
analýzy obrazu bylo zjistěno, že přirůstek plochy SRSE po
pasažovani je zavislý na jeho pocatecni velikosti a take na
prostorove orientaci embryi. Při nedodrženi původni orientace
byl přirůstek plochy SRSE mensi. Se stařim kultury vliv
orientace SRSE na jeho růst roste. Na zakladě tohoto zjistěni
byla stanovena životnost embryi v jednotlivých castech SRSE
fluorescencnimi barvivy fluoresceindiacetatem a propidium
jodidem. Životnost embryi byla vyssi ve vnějsich castech
shluku. Embrya z jednotlivých casti shluku byla dale pasažovana
a byl sledovan jejich dalsi růst. Přirůstek plochy SRSE
pochazejicich z vnějsich casti byl větsi než přirůstek SRSE z
vnitřnich casti. Byla potvrzena diferenciace embryogenni
kultury raných somatických embryi smrku ztepileho.
1. UVOD Mechanismy detoxikace a metabolismus těžkých kovů jsou
intenzivně studovany u různých organismů. Zvýsena koncentrace
esencialnich těžkých kovů, jako je zinek, měď a železo, nebo
kovů toxických (kadmium, chrom, olovo a arsen), vyvola v
organismech zvýsenou syntezu nizkomolekularnich proteinů a
peptidů. Významna skupina těchto latek umožňuje regulaci iontů
kovů a tak udržuji stalost vnitřniho prostředi homeostazy.
Nejjednodussi vsudypřitomnou slouceninou, ktera se detoxikace
ucastni, je glutathion (GSH, Glu-Cys-Gly). Je znamo, že
glutathion je zapojen do askorbato-glutathionoveho
cyklu.Nedavno bylo objeveno, že GSH je spojen s metabolismem
oxidu dusnateho (NO). NO je jedna z nejvýznamnějsich signalnich
molekul u živocichů, ale i u řady rostlin. Na sulfhydrylovou
skupinu glutathionu se může vazat NO a vznika tak
S-nitrosoglutathion (GSNO). Navic z molekuly nitrosoglutathionu
se oxid dusnatý může uvolňovat za specifických podminek (vlivem
světla, těžkých kovů apod.). V nasi praci bylo studovano
zakladni elektrochemicke chovani GSH, oxidovaneho glutathionu a
GSNO pomoci elektroanalytických metod předevsim pomoci cyklicke
voltametrie a diferencni pulzni voltametrie. Předpokladame, že
nase výsledky bude možne využit pro in vivo experimenty. 2.
MATERIAL A METODY Analýza glutathionů (redukovaneho,
oxidovaneho a nitroso) byla provedena pomoci univerzalniho
elektrochemickeho analyzatoru AUTOLAB (Eco Chemie) v
třielektrodovem uspořadani. Jako pracovni elektroda byla
použita rtuťova kapkova elektroda, pomocna elektroda byla
uhlikova tycinka a referentni elektroda Ag/AgCl 3 M KCl. Jako
zakladni elektrolyt byl použit boratový pufru. Pro Brdickovu
reakci byl použit zakladni elektrolyt (1 mmol.dm-3 Co(NH3)6Cl3
a 1 mol.dm-3 amonný pufr; NH3(aq) + NH4Cl, pH = 9,6).
Elektrolyt byl po každých 5 analýzach vyměněn. 3. VÝSLEDKY A
DISKUSE V nasich experimentech jsme se nejdřive zaměřili na
studium zakladniho elektrochemickeho chovani redukovaneho,
oxidovaneho a nitroso glutathionu pomoci cyklicke voltametrie v
boratovem pufru. Na ziskaných voltamogramech jsme pozorovali,
že každý ze sledovaných glutathionů poskytuje charakteristický
elektrochemický signal. Zajimalo nas, zda bude možne rozlisit
jednotlive glutathiony take pomoci Brdickovy reakce. Na
ziskaných DPV voltamogramech byly pozorovany již dřive popsane
signaly, ktere odpovidaji redukci Co2+ na Co0 (~-1,0 V),
komplexu kobaltu s SH skupinami glutathionů oznacený jako RS2Co
(~-1,0 V) a dalsi tři katalyticke piky Cat1 (-1,1 V); Cat2
(-1,2 V) a Cat3 (-1,4 V). Z výsledků je zřejme, že redukcni
signal kobaltu(II), který je pozorovan v zakladnim elektrolytu
při potencialu -1,2 V, se posouva v přitomnosti glutathionu
směrem do pozitivnich potencialů. Pozorovane změny signalu
souvisi s vazbou kobaltitých komplexů do struktury glutathionů
za vzniku specifickeho komplexu RS2Co. Na ziskaných
experimentalnich zaznamech je možne vidět zcela rozdilne
chovani jednotlivých glutathionů (redukovaný, oxidovaný a
nitroso) při vzniku několika dalsich doposud nepopsaných piků.
Pozorovane rozdily v katalytických signalech pravděpodobně
souvisi s rozdilnou strukturou jednotlivých glutathionů
(skupina S-S, S-H, S-NO). Zjistili jsme, že signal Cat3 u
studovaných thiolů linearně zavisi na jejich koncentraci v
koncentracni oblasti (1-50 ľg.ml-1). 4. ZAVĚR Studium
thiolových sloucenin je stale vysoce aktualni otazka. Lze
předpokladat, že elektrochemicka analýza usnadni studium
jednotlivých glutathionů.
The influence of Cd-EDTA (50, 250 and 500 μmol l-1) on spruce cultures was investigated by image analysis of early somatic embryos (ESEs) of spruce. Image analysis with double staining can be used for the determination of viability of the culture. The glutathione content was studied by adsorptive transfer stripping differential pulse voltammetry. The cluster area decreased and the number of dead cells increased with increasing concentration of Cd and the time of Cd treatment. The glutathione content was nine times higher in ESEs treated with 500 μmol l-1 Cd-EDTA after twelve days in comparison with the control.
UVOD Vsechny žive organismy (eukaryoticke i prokaryoticke)
přichazi do kontaktu nejen se složkami jejich životniho
prostředi, ale take s celou skupinou latek, ktere přijimaji
jako potravu nebo přimo s potravou. Významnou cast zaujimaji
latky anorganicke povahy. Aby byly organismy schopny udržovat
svoje stale prostředi (homeostasu), vyvinuly si celou skupinu
biochemických procesů. Je znamo, že řada iontů (obzvlastě kovů)
se může vazat na specialni proteiny obsahujici ve sve struktuře
sulfhydrylove skupiny. Mezi takove naleži vsudypřitomný malý
tripeptid glutathion, u rostlin navic fytochelatiny a u
živocichů metalothionein. Hlavni fyziologickou funkci těchto
peptidů a proteinů v organismech je vyvazani atomu těžkeho
kovu, a tak zabraněni jeho toxickeho ucinku. Navic tyto thioly
hraji velmi významnou roli v procesu redoxnich reakci (např. v
askorbatovem cyklu), cimž pravděpodobně ovlivňuji i hladinu
kyslikových radikalů. Jak lze předpokladat studium těchto latek
je velmi důležite a významne pro pochopeni vztahů mezi ionty
kovů, stalosti vnitřniho prostředi a kyslikovými radikaly.
Navic v zemich Evropske unie bylo rokem 2006 zcela zakazano
využivat antibioticke preparaty ve velkochovech hospodařských
zviřat jako podpůrných preparatů a velmi intenzivně se zacina
diskutovat využivani specialnich preparatů založených na
mikroelementech. VÝSLEDKY V nasi praci jsme se zaměřili nejprve
na studium elektrochemickeho chovani vybraných thiolových
sloucenin (redukovaný, oxidovaný a nitroso glutathion, a
fytochelatin). Cyklicke voltamogramy byly zaznamenavany od
pocatecniho potencialu -0,2V do -0,8 V, kde byl bod obratu pro
vsechny nase experimenty. Tento elektrochemický zaznam nam
umožnil snadne rozliseni jednotlivých thiolů. GSH poskytuje
signal při potencialu PGSH (-0,44 V), GSSG pik PGSSG (-0,69 V),
GSNO (-0,55 V) a PC pik PPC2 (-0,62 V). Se snižujici se
koncentraci jednotlivých thiolů dochazi k posunu jednotlivých
piků, pro GSH do negativnich potencialů a GSSG, GSNO a PC2 do
pozitivnějsich potencialů. Avsak kolem koncentrace 10 ľM je
pozorovatelný již pouze jeden signal při potencialu -0,53 V bez
ohledu na to, jaký thiol byl analyzovan. Pozorovaný jev bude
již pravděpodobně souviset předevsim s redukci vznikle
slouceniny se rtuti, kdežto při vyssich koncentracich probihaji
mnohem složitějsi elektrochemicke reakce. Pro prakticke
aplikace je vsak velmi významne studium interakce těžkeho kovu
s thiolovými slouceninami. Je znamo, že PC važe do sve molekuly
atomy těžkých kovů. Proto nas zajimalo, jak bude možne
pozorovat probihajici interakci PC s těžkým kovem. Vyzkouseli
jsme tedy ke 150 ľM Cd(II) postupně přidavat PC a tyto změny
sledovat na cyklických voltamogramech. Sledovali jsme postupný
pokles signalu Cd(II) v zavislosti na koncentraci PC. Ziskana
zavislost exponencialně klesa (y = 90.383e-0.0067x; R2 =
0.9924), a je možne ji rozdělit dvě samostatne zavislosti i)
strmějsi (y = -0.3473x + 83.666; R2 = 0.9799) a ii) pozvolnějsi
(y = -0.0745x + 37.649; R2 = 0.9566). Pozorovaný zlom je možne
urcit kolem 150 ľM koncentrace PC. Dale nas zajimala interakce
GSH a Cd(II). Na ziskaných voltamogramech byla pozorovatelna
vazba Cd(II) na SH skupinu GSH. Tato vazba se projevila
signalem při potencialu kolem -0,71 V. Při změně koncentrace
jednotlivých studovaných thiolů byla pozorovana linearně se
měnici zavislost. Navic jsme se zabývali sledovanim interakce
předevsim fytochelatinu a glutathionu se specialnimi doplňky
výživy zviřat.
Background Nitric oxide (NO) is an important signalling molecule in plants. It influences many physiological processes [1]. During biotic stress plants produce NO and reactive oxygen species (ROS) simultaneously. The ratio of steady state concentrations of NO and ROS is decisive for the induction or prevention of cell death [2]. This effect was also demonstrated using artificial donor systems to generate NO and ROS (e. g. H2O2) [2,3]. The aim of our work was to verify the specific effect of sodium nitroprusside (SNP; NO donor) and glucose with glucose oxidase (GGO; H2O2 donor) on the cell death process.
Benefit of thrombolytic therapy in patients with acute stroke, who are on anticoagulant treatment, is not well addressed. The aim of this study was to investigate whether apixaban can modify the thrombolytic efficacy of alteplase in vitro . Static and flow models and two variants of red blood cell (RBC) dominant clots, with and without apixaban, were used. Clots were prepared from the blood of healthy human donors and subsequently exposed to alteplase treatment. Apixaban and alteplase were used in clinically relevant concentrations. Clot lysis in the static model was determined both by clot weight and spectrophotometric determination of RBC release. Clot lysis in the flow model was determined by measuring recanalization time, clot length and spectrophotometric determination of RBC release. In the static model, clots without apixaban; compared to those with apixaban had alteplase-induced mass loss 54 ± 8% vs. 53 ± 8%, p = 1.00; RBC release 0.14 ± 0.04 vs. 0.12 ± 0.04, p = 0.14, respectively. Very similar results were obtained if plasma was used instead of physiological buffered saline as the incubation medium. In the flow model, clot lysis without apixaban; compared to those with apixaban was as follows: recanalization time 107 ± 46 min vs. 127 ± 31 min, p = 1.00; recanalization frequency 90 ± 22% vs. 90 ± 22%, p = 1.00; clot volume reduction 32 ± 15% vs. 34 ± 10%, p = 1.00; RBC release 0.029 ± 0.007 vs. 0.022 ± 0.007, p = 0.16, respectively. Apixaban had no positive effect on alteplase-induced thrombolysis in both the in vitro static and flow models. Our data support current clinical practice, such that thrombolysis is contraindicated in stroke treatment for patients who have been treated with anticoagulants.
