Oocyte maturation is a critical step for in vitro embryo production. In female cats, findings on the influence of the estrous cycle stage on oocyte quality and maturation are contradictory. Little is known about this phenomenon in female cats in the tropics. This study aimed to assess the effect of the estrous cycle stage on oocyte quality and subsequent capacity to complete nuclear maturation in cats in a tropical environment. Ovaries from 18 sexually matured cats were collected during ovariohysterectomy. Cumulus–oocyte complexes (COCs) were released from follicles by slicing and fragmentation of the ovarian cortex. According to morphological characteristics, COCs were classified into grades I–II (suitable) and III–IV (no suitable). Only suitable COCs from each cat were cultured for in vitro maturation. Nuclear oocyte maturation was assessed by the presence of a telophase I or metaphase II plate with extrusion of the first polar corpuscle. A significantly greater number of oocytes per ovary were collected from queens in inactive than in follicular or luteal phase. Proportions of suitable COCs were similar among groups. Rate of oocyte maturation did not differ among stages of the estrous cycle, nor did the proportion of non–matured or degenerated oocytes. The age of the queens did not affect the percentage of oocyte maturation. In conclusion, the quality and rate of oocytes maturation were similar in the three stages of estrous cycle examined.
La integridad de la membrana plasmatica (MP) y acrosomal (MA) han sido dos de los parametros de valoracion seminal mas estudiados por su rol preponderante como limite celular y por ser responsable de hacer efectivas las interacciones entre celulas, tanto en terminos de integridad morfologica, como funcional. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de la criopreservacion sobre el porcentaje de espermatozoides vivos (VIT), acrosomas danados (DAR), y la integridad estructural y funcional de la MP y MA de espermatozoides provenientes de 5 eyaculados frescos y 5 pajuelas descongeladas de 4 toros mediante frotis tenidos con eosina-nigrosina. La integridad funcional de estas membranas fue evaluada mediante los tests osmoticos (HOST y ORT). Los datos obtenidos fueron analizados con el procedimiento GLM (SAS®) y cuando se observaron diferencias se cuantificaron los efectos mediante el LSMEANS. Todos los valores de calidad espermatica estudiados fueron afectados significativamente por la criopreservacion (VIT, DAR, ORT y HOST). El proceso de congelacion-descongelacion causo un marcado efecto detrimental sobre la integridad estructural y funcional de la MP y MA de los espermatozoides evaluados (P<0,05). Sin embargo, se pudo demostrar como los espermatozoides resisten de manera diferente los efectos detrimentales de la criopreservacion. Asi mismo, el estudio confirma que el dano criogenico puede ocurrir indistintamente sobre la integridad estructural y funcional MP y MA, lo que afectaria la capacidad fecundante de las muestras seminales destinadas a Inseminacion Artificial.
Resumen es: El proposito de este estudio fue cuantificar la presencia de espermatozoides con cromatina danada e inmadura en el semen criopreservado de tor...
The integrity of the plasma membrane (MP) and the acrosome (MA) have been two of the most studied seminal evaluation parameters due to their role as a cell boundary and because they are responsible for interactions between cells effective. To assessing more objectively the effects of osmotic stress on the integrity of the PM and MA, as well as the rate of change that occurred during seminal cryopreservation, five freshly collected ejaculates were evaluated, refrigerated at 5 ºC and thawed per ram/session during 5 consecutive weeks. Using eosin-nigrosin (EN) staining, vitality (VIT), morpho abnormalities and cellular response were evaluated after performing osmotic resistance (ORT) and endosmosis (HOST) tests. The direct effect of anysosmosis and cryopreservation on the dependent variables were analyzed using the GLM procedure (SAS®) and when differences were observed, the effects were quantified using the LSMEANS. All the sperm quality values studied were significantly affected (P <0.001) by cryopreservation (VIT, ORT, HOST). The ORT demonstrated how the acrosome was one of the structures most affected by cryopreservation (P <0.001). In conclusion, the present study confirms that anysosmotic stress affects the sperm cell in an important way, compromising the reference values that quantify semen quality, especially MA and MP.
The aim of this study was to determine the percentage of sperm with damaged chromatic measure with toluidine blue stain and it´s relationship with motility and viability in criopreserverd semen from Brahman bulls. Three ejaculates from six Brahman bulls were used. Immediately after thawing, sperms were stained with toluidine blue to establish chromatin integrity (sperms with normal chromatin were light blue or green while sperms with damaged chromatin were dark blue or violet). Sperms were also stained with eosin-nigrosin to determine viability (live sperms were unstained while dead sperms were pink). Motility was measured under light microscope. Effects of bull, ejaculate, and the interaction between variables were assessed. The percentage of live sperms was 50.02 ( ± 14.13%). The mean motility was 33.88 (± 12.43%), while the percentage of sperms with damaged chromatin was 4.17 ( ± 2.96%). Viability was positively correlated with motility (r=0.77217, p=0.0002), and negatively correlated with damaged chromatin sperms (r= -0.43104, p=0.0087). Motility percentage was negatively correlated with the percentage of sperms with damaged chromatin (r=-0.48337, p=0.0421). In conclusion, cryopreserved semen of Brahman bulls presented a low level of chromatin damage, and this trait was negatively correlated with sperm motility and viability.Key words: brahman bulls, cryopreservation, sperm chromatin, toluidine blue stain.ResumenEl objetivo del presente trabajo fue determinar el porcentaje de espermatozoides con cromatina dañada medida con la tinción de azul de toluidina, y su relación con la motilidad y la vitalidad del semen criopreservado de toros Brahma. Para ello, se utilizó semen de tres eyaculados de seis toros Brahman, el cual una vez descongelado se procedió a teñir con azul de toluidina para determinar la integridad de la cromatina (espermatozoides con cromatina normal teñidos de azul o verde claro; espermatozoides con cromatina anormal teñidos de azul oscuro o violeta), también se tiñeron con eosinanigrosina para determinar la viabilidad (espermatozoides vivos permanecen blancos; espermatozoides muertos se tiñen de rosado) y se estimó la motilidad espermática mediante microscopía óptica. Se evidenciaron las diferencias en todos los parámetros evaluados debidas al efecto toro y al eyaculado, así como a la interacción entre estas dos variables. El porcentaje de espermatozoides vivos fue de 50.02 ± 14.13% y la motilidad espermática promedió un 33.88 ± 12.43%, mientras que el porcentaje de espermatozoides con cromatina dañada fue de 4.17 ± 2.96%. El porcentaje de espermatozoides vivos se correlacionó positivamente con la motilidad (r=0.77217, p=0.0002), y negativamente con el porcentaje de espermatozoides con cromatina dañada (r= -0.43104, p=0.0087), mientras que el porcentaje de motilidad se correlacionó negativamente con el porcentaje de espermatozoides con cromatina anormal (r= -0.48337, p=0.0421). En conclusión, el semen criopreservado de toros Brahman presenta un bajo nivel de espermatozoides con daño en la cromatina, lo cual se correlaciona negativamente con la motilidad y la vitalidad espermática.Palabras clave: criopreservación, cromatina espermática, tinción azul de toluidina, toros brahman.ResumoO objectivo deste estudo foi determinar a percentagem de espermatozóides com cromatina danificada, determinada pela coloração com azul de toluidina e sua relação com a viabilidade e a mobilidade do esperma cripreservado de touros Brahman. Para isso, foram utilizados três ejaculados de sêmen de seis touros Brahman, que uma vez descongelado foram coradas com azul de toluidina para determinar a integridade da cromatina (espermatozóides com cromatina normal coloream de azul ou verde; cromatina de espermatozóides con cromatina danificada, coloream de azul escuro ou violeta). Também foram corados com eosina nigrosina para determinar a viabilidade (espermatozóides vivos permanecem brancos e os mortos de cor rosa) e a motilidade espermática foi estimada por microscopia de luz. Foram encontradas diferenças significativas em todos os parâmetros, devido ao efeito de touro e o ejaculado, bem como a interacção entre essas duas variáveis. A percentagem de espermatozóides vivos foi de 50.02 ± 14.13% e motilidade espermática média de 33.88 ± 12.43%, enquanto a percentagem de espermatozóides com cromatina danificada foi de 4.17 ± 2.96%. A percentagem de espermatozóides vivos foi positivamente correlacionada com a motilidade (r=0.77217, p=0.0002) e negativamente com a porcentagem de espermatozóides com cromatina danificada (r = -0.43104, p= 0.0087), enquanto que a percentagem de motilidade correlacionou negativamente com a percentagem de espermatozóides com cromatina danificada (r = -0.48337, p=0.0421). Em conclusão, o sêmen de touros Brahman criopreservados tem um baixo nível de dano da cromatina, que está correlacionada negativamente com a motilidade e a vitalidade do esperma.Palabras-chave: criopreservação cromtina espermatica, coloração de azul de toluidina, touros.
Para determinar los parametros biometricos de la cabeza espermatica en semen porcino, asi como evidenciar la presencia de subpoblaciones espermaticas fueron evaluadas 78 muestras seminales de 27 verracos. Sobre semen recien colectado y refrigerado fue evaluada la motilidad, vitalidad, acrosomas alterados y/o ausentes y anormalidades espermaticas. Mediante el analisis computarizado de la morfologia espermatica (ASMA), en frotis tenidos con Hemacolor®, se realizaron las mediciones de la cabeza espermatica: longitud (L, μm), ancho (W, μm), area (A, μm2), perimetro (P, μm) y elongacion (E). El efecto del proceso de refrigeracion sobre las variables de calidad seminal y biometria se analizaron utilizando el GLM del SAS. Para identificar las subpoblaciones espermaticas, se utilizo el procedimiento FASTCLUS del SAS. La refrigeracion a 16oC por 24 horas afecto negativamente la motilidad espermatica e indujo el aumento de la L y el W de la cabeza de los espermatozoides (P<0,01). Se logro establecer la presencia de tres subpoblaciones espermaticas en el semen de verracos, 10,45% en la subpoblacion 1 (grandes), 44,64% en la subpoblacion 2 (medianos) y 45,25% en la subpoblacion 3 (pequenos). La refrigeracion afecto la distribucion de los espermatozoides dentro de las subpoblaciones, existiendo un incremento del 6% en la subpoblacion 2 en funcion de una leve disminucion de las subpoblaciones 1 y 3, comparando con el semen recien recolectado. El proceso de refrigeracion indujo cambios ligeros en la biometria de la cabeza de los espermatozoides y en su distribucion porcentual en subpoblaciones espermaticas. Palabras clave: semen, morfometria, refrigeracion, subpoblaciones espermaticas, verracos.